应用芯片式数字PCR检测人血清中登革病毒载量

目的建立芯片式数字PCR绝对定量技术,用于登革病例血清中登革病毒载量绝对定量并分析载量变化情况。方法选取发病1～7d登革实验室确诊病例血清样本,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,取3μL或4. 5μL cDNA,配制15μL反应体系,采用Quant Studio 3D Digital PCR Chip Loader仪器制作芯片,将芯片置于Dual Flat Block Gene Amp PCR System 9700运行PCR,最后在Quant StudioTM3D Digital PCR System中读取结果并应用Quant StudioTM3D Analysis SuiteTM Software进行分析,根据实验稀释倍数计算血清中登革病毒载量。结果芯片制作良好,有效孔数高,检测结果重复性较好,示病例发病第1～7d血清中的登革病毒载量分别是107. 646,107. 544,107. 298,106. 990,105. 823,104. 732,104. 221copies/m L。结论应用芯片式数字PCR检测血清中登革病毒载量的方法可行,可应用于登革病毒载量的绝对定量。登革病毒载量随着病程的发展而降低。