小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化

被引：5

作者：

魏波 ^{[1
]}

夏立新 ^{[2
]}

陈红兵 ^{[1
,3
]}

邬玉兰 ^{[2
]}

刘志刚 ^{[2
]}

机构：

[1] 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室

[2] 深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所

[3] 南昌大学中德联合研究院

来源：

江西师范大学学报(自然科学版) | 2010年 / 34卷 / 06期

关键词：

小龙虾; 钙结合蛋白; 基因表达;

D O I：

10.16357/j.cnki.issn1000-5862.2010.06.014

中图分类号：

S917.4 [水产动物学];

学科分类号：

0908 ;

摘要：

从小龙虾(Procambarus clarkii:pc)的肌肉组织中提取其总RNA,设计特异性引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出编码小龙虾钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein:SCP)基因片段,扩增片段为582bp.该序列与已报道的几类虾SCP序列比对结果表明:在氨基酸水平上同源性为81%～96%.将SCP基因与pET-28a载体连接,构建了原核表达载体pET-28a-pcSCP重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE结果表明:表达蛋白约为22kDa,与预期的相对分子质量大小相符.并用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,得到了纯度较高的pcSCP.研究重组蛋白pcSCP的获得,为pcSCP变应原性及相关的研究奠定基础.

引用

页码：567 / 571

页数：5

共 9 条

[1] 花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定 [J].

易海涛 ;

刘志刚 ;

闫浩 ;

刘芳 ;

赵郭存 ;

夏立新 .

江西师范大学学报(自然科学版), 2010, 34 (05) :531-535

[2] 牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建 [J].

闫浩 ;

邬玉兰 ;

夏立新 ;

刘志刚 .

江西师范大学学报(自然科学版), 2010, 34 (03) :244-248

[3] 食坑虾引起过敏性休克1例 [J].

安爱芝 ;

孙月芹 .

医学理论与实践, 2003, (08) :877-877

[4]

Construction and characterization of bivalent vaccine candidate expressing HspA and Mr18 000 OMP from Helicobacterpylori[J]. Zheng Jiang Xiao-Hong Tao Pi-Long Wang, Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital, Chongqing University of Medical Sciences, Chongqing 400016, China Ai-Long Huang, Institute of Viral Hepatitis, Chongqing University of Medical Sciences, Chongqing 400010, China.World Journal of Gastroenterology. 2003(08)

[5] 抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达 [J].

安广宇 ;

董宁征 ;

阮长耿 .

免疫学杂志, 2001, (03) :200-203

[6]

Sarcoplasmic calcium-binding protein is an EF-hand–type protein identified as a new shrimp allergen[J] . The Journal of Allergy and Clinical Immunology . 2009 (1)

[7] Molecular characterization of the sarcoplasmic calcium-binding protein (SCP) from crayfish Procambarus clarkii [J].

Gao, Yongping ;

Gillen, Christopher M. ;

Wheatly, Michele G. .

COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY B-BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY, 2006, 144 (04) :478-487

[8]

Seafood Allergy and Allergens: A Review[J] . S. B. Lehrer,R. Ayuso,G. Reese.Marine Biotechnology . 2003 (4)

[9] HYPERSENSITIVITY REACTIONS TO CRUSTACEA AND MOLLUSKS [J].

DAUL, CB ;

MORGAN, JE ;

LEHRER, SB .

CLINICAL REVIEWS IN ALLERGY, 1993, 11 (02) :201-222

← 1 →