自身淬灭探针荧光定量PCR检测BK多瘤病毒方法的建立与评价

被引：5

作者：

黄彬 ^{[1
]}

陈茶 ^{[2
]}

姜傥 ^{[1
]}

机构：

[1] 中山大学附属第一医院检验医学部

[2] 广东省中医院检验科

来源：

中华医院感染学杂志 | 2009年 / 19卷 / 12期

关键词：

BK多瘤病毒; 自身淬灭探针; 荧光定量聚合酶链反应;

D O I：

暂无

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

摘要：

目的利用自身淬灭探针技术建立一种敏感、特异、快速、价廉的BK多瘤病毒(BKV)荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-BK作为标准品,自行设计自身淬灭探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价及初步临床应用。结果成功构建了重组质粒pGEM-11Zf-BK,建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法,其线性检测范围为103～109拷贝/ml;灵敏度为1000拷贝/ml;重复性:高拷贝样品的天间CV为3.06%,批内CV为1.49%,批间CV为3.27%;低拷贝样品的天间CV为2.55%,批内CV为0.65%,批间CV为3.36%,特异性为100.00%;用该方法检测52例肾移植受者的血、尿标本,结果发现肾移植受者血、尿BKV DNA的阳性率明显高于健康对照者,分别为15.38%、32.69%,尿BKV DNA的载量明显高于血BKV DNA的载量(P<0.05)。结论首次建立了以自身淬灭探针技术为平台的BKV荧光定量PCR检测方法,该方法灵敏、特异,快速;该研究对应用自身淬灭探针技术开发其他病原体检测试剂有一定的参考价值。

引用

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