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高效的水稻基因枪转化和可育转基因植株再生
被引:10
作者:
许新萍
胡明
蚁乐洲
卫剑文
李宝键
机构:
[1] 中山大学生物工程研究中心
来源:
基金:
广东省自然科学基金;
关键词:
水稻;
胚性愈伤组织;
基因枪转化;
雪花莲凝集素基因;
hpt基因;
D O I:
暂无
中图分类号:
S511 [稻];
学科分类号:
摘要:
从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3~4周的愈伤组织,经过1~3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验.将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、hpt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组织,在含30~50mg/L潮霉素的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养.使用干燥处理来增加再生频率和出苗数,并摸索出移栽再生小植株的有效方法.从接种到获得转化小植株只需要13~21周.三次转化实验共轰击536块胚性愈伤组织,获得199个系的2783株潮霉素抗性植株.DNA点杂交检测表明73.4%的抗性植株同时含有GNA基因和hpt基因,Southern杂交分析进一步证实了GNA基因在转基因水稻基因组中的整合.89.3%的转基因植株可育.分子证据表明GNA基因和hpt基因已遗传至子代,并且主要按孟德尔规律进行分离.
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