猪肺炎支原体P97 TaqMan-BHQ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

被引：17

作者：

武昱孜 ^{[1
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靳蒙蒙 ^{[1
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白方方 ^{[1
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张旭 ^{[1
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华利忠 ^{[1
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雷治海 ^{[2
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邵国青 ^{[1
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机构：

[1] 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

[2] 南京农业大学动物医学院

来源：

中国兽医科学 | 2012年 / 42卷 / 12期

关键词：

猪肺炎支原体; P97基因; 荧光定量PCR; TaqMan-BHQ探针;

D O I：

10.16656/j.issn.1673-4696.2012.12.013

中图分类号：

S858.28 [猪];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

根据猪肺炎支原体(Mhp)P97基因的保守序列设计合成了引物和TaqMan-BHQ探针,建立了快速检测Mhp的TaqMan-BHQ荧光定量PCR方法。结果显示,该方法特异性良好,与其他病原不发生交叉反应;最低检测限可达10copies/μL,敏感性高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间的线性关系表达式为Ct=-3.426×lg(conc)+43.343,有良好的线性关系,标准曲线的相关系数为0.997,扩增效率为95.85%,重复性良好。对江苏省某猪场的48份猪肺组织进行荧光定量PCR检测,结果有43份肺组织呈现阳性,阳性检出率为89.58%,比巢式PCR的敏感性高。表明,该检测方法能用于Mhp的快速检测,可对猪支原体肺炎的早期诊断和流行病学调查提供新的技术手段。

引用

页码：1268 / 1272

页数：5

共 8 条

[1] PCR技术检测猪肺炎支原体的研究进展 [J].

张旭 ;

白方方 ;

武昱孜 ;

刘茂军 ;

冯志新 ;

熊祺琰 ;

张映 ;

邵国青 .

生物技术通报, 2012, (05) :54-60

[2] 实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用 [J].

薛霜 ;

独军政 ;

高闪电 ;

常惠芸 .

中国农学通报, 2010, (07) :11-15

[3] 猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用 [J].

逯晓敏 ;

冯志新 ;

刘茂军 ;

吴叙苏 ;

甘源 ;

张映 ;

邵国青 .

江苏农业学报, 2010, 26 (01) :91-95

[4] 猪支原体肺炎诊断及检测技术 [J].

申开梅 ;

李颖平 ;

张映 .

畜禽业, 2006, (11) :42-44

[5] 定量PCR技术的研究现状及应用概述 [J].

帅小蓉 ;

夏庆友 ;

朱勇 .

蚕学通讯, 2002, (04) :20-27

[6] 荧光定量PCR技术及其在临床上的应用 [J].

邓少丽 ;

罗阳 .

国外医学(临床生物化学与检验学分册), 2002, (05) :301-303

[7]

实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测技术[M]. 中国计量出版社 , 朱水芳主编, 2003

[8]

Genotyping of Giardia duo-denalis cysts by new real-time PCR assays for detection ofmixed infections in human samples .2 Almeida A,Pozio E,CacciòS M. Appl Environ Microbiol . 2010

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