HPLC法同时测定大鼠胆汁中二苯乙烯苷及其代谢物的浓度

目的:建立大鼠胆汁中二苯乙烯苷及其代谢物浓度的HPLC测定方法,明确二苯乙烯苷的代谢途径。方法:胆汁样品或用重蒸水稀释后的胆汁样品200μL,加入甲醇10μL后直接离心测定二苯乙烯苷及其代谢物的浓度。Dikma Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃;流动相为乙腈-0.1%醋酸梯度洗脱(0～10min,15:85;15～23min,25:75;25～30min,100:0),流速1mL.min-1;检测波长320nm。测定大鼠灌胃给予二苯乙烯苷60mg.kg-1后胆汁中二苯乙烯苷及其代谢物的累积排泄率。结果:二苯乙烯苷及其代谢物在胆汁中的线性范围分别为12.0～0.8μg.mL-1和110～0.9μg.mL-1,日内和日间RSD均小于7.0%,准确度在±4.5%之间。提取回收率均大于99.1%。大鼠灌胃给予二苯乙烯苷60mg.kg-1后24h胆汁中二苯乙烯苷及其代谢物的累积排泄率分别为(0.084±0.04)%和(36.87±12.94)%。结论:经方法学考察符合生物样品的测定要求,可应用于大鼠胆汁中二苯乙烯苷及其代谢物浓度的测定,二苯乙烯苷在大鼠体内主要以代谢物的形式由胆汁排泄。