重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性

被引:16
作者
崔有宏
陈苏民
刘新平
陈南春
薛泳涛
机构
[1] 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
关键词
人骨形成蛋白-3(hBMP-3),DNA重组,基因表达,诱骨活性;
D O I
10.13865/j.cnki.cjbmb.1997.05.005
中图分类号
Q51 [蛋白质];
学科分类号
摘要
以双顺反子表达载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达了人骨形成蛋白-3羧基端肽段(hBMP-3C),表达量占菌体总蛋白量的18.5%.目的蛋白为25kD、含hBMP-3C端215个氨基酸残基组成的肽段,包括hBMP-3成熟肽和一部分前肽.表达产物以包涵体的形式存在,用含TritonX-100的洗涤液和5mol/L以下脲溶液连续洗涤,可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白-3C端肽.经复性处理成可溶性蛋白,植入小鼠肌肉内,第14d组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成,第21d可见成骨细胞和骨基质形成.将rhBMP-3C与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验,21d组织切片上可见硬质骨形成.结果表明:大肠杆菌表达的hBMP-3C经复性后具有诱骨活性,糖基化并非BMP-3活性所必需.
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