一种水产动物病毒现场检测免疫芯片的制备与应用

被引：10

作者：

徐晓丽

绳秀珍

战文斌

机构：

[1] 中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

来源：

海洋与湖沼 | 2010年 / 41卷 / 05期

关键词：

单克隆抗体; 抗体芯片; 白斑综合征病毒; 淋巴囊肿病毒; 琼脂糖凝胶;

D O I：

暂无

中图分类号：

S941 [鱼病学];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

采用原子力显微镜对氨基化玻片及6种不同方法修饰玻片进行表面特征分析,并比较了硝酸纤维素(NC)膜、PVDF膜以及以上不同修饰玻片对抗体的固定效率、固定效果,最终选择琼脂糖修饰玻片作为芯片载体。将纯化后的兔抗血清(捕获抗体)点样至琼脂糖修饰玻片上,制备免疫芯片,与待检样品(病毒感染的靶器官组织)匀浆液孵育形成复合物,该复合物被辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性单克隆抗体(单抗)识别,经底物显色,得到肉眼可见的检测结果。通过改变芯片制备及应用过程中的具体条件参数,对各条件进行了优化,并采用生物素-链亲和素(BAS)标记特异性单抗作为检测抗体以提高检测灵敏度。基于此夹心免疫分析原理制备的WSSV、LCDV现场检测免疫芯片,病毒的最低检出量分别为82.50ng/ml、0.88μg/ml,在一定的抗原浓度范围内,病毒浓度的对数值与信号强度呈线性关系;采用BAS放大检测信号后,病毒的最低检出量为12.38ng/ml、0.22μg/ml。该免疫芯片与酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫荧光法(IFAT)对同种样品的检测结果高度一致。

引用

页码：698 / 706

页数：9

共 15 条

[11]

Hydrogel-Based Protein Microchips: Manufacturing, Properties, and Applications[J] . A.Yu. Rubina,E.I. Dementieva,A.A. Stomakhin,E.L. Darii,S.V. Pan’kov,V.E. Barsky,S.M. Ivanov,E.V. Konovalova,A.D. Mirzabekov.BioTechniques . 2003 (5)

[12]

Toward optimized antibody microarrays: a comparison of current microarray support materials[J] . Analytical Biochemistry . 2002 (2)

[13]

Detection of multiple proteins in an antibody-based protein microarray system[J] . Ruo-Pan Huang.Journal of Immunological Methods . 2001 (1)

[14]

Comparison of chemical cleaning methods of glass in preparation for silanization[J] . J.J Cras,C.A Rowe-Taitt,D.A Nivens,F.S Ligler.Biosensors and Bioelectronics . 1999 (8)

[15] Production of monoclonal antibodies (MAbs) against white spot syndrome virus (WSSV) [J].

Zhan, WB ;

Wang, YH ;

Fryer, JL ;

Okubo, K ;

Fukuda, H ;

Yu, KK ;

Meng, QX .

JOURNAL OF AQUATIC ANIMAL HEALTH, 1999, 11 (01) :17-22

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