三种软骨细胞分离培养方法对细胞骨架的影响比较

目的比较分离培养人类软骨细胞的3种方法,探讨各种方法的特点及对细胞骨架的影响。方法分别采用酶消化法、组织贴块法、酶消化结合组织贴块法分离软骨细胞,测量每种方法分离的软骨细胞瓶底汇合形成单层时间,进行比较,以甲苯氨蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学评价细胞的生物特性,并用磁驱动原子力显微镜(MAC mode AFM)对二代细胞表面形态及细胞骨架特性进行检测。结果MAC mode AFM检测显示,酶消化结合组织贴块法分离软骨细胞表面形态、细胞骨架分布更接近生理状态,甲苯氨蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示强阳性,进行方差分析及q检验,3种方法分离的软骨细胞瓶底汇合形成单层时间差异有统计学意义(P<0.05)。结论酶消化结合组织贴块法细胞分离效率高、生长速度快、细胞骨架特性保持更好、细胞纯度高,在细胞骨架研究中可优先选用。