内热针疗法对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡及Caspase-3和Caspase-9表达的影响

目的:探究内热针疗法对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠软骨细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶3和9(Caspase-3和Caspase-9)表达的影响。方法:采用随机数字分组法将32只大鼠分为正常组、模型组、对照治疗组和治疗组,每组8只。正常组不予任何治疗,其余3组采用经改良后的Videman法左后肢伸直位固定制动法建立大鼠KOA模型,牵拉大鼠左后肢踝关节使其处于完全伸直位,并采用树脂绷带进行固定,共制动6周。造模成功后,模型组大鼠不给予任何治疗;对照治疗组大鼠给予中频脉冲电疗法;治疗组大鼠予内热针进行治疗,每次30min,每天1次,每周休息2d,共治疗3周。3周后,分离损伤软骨组织,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining,HE)观察各组大鼠膝关节软骨组织病理变化;采用酶联免疫吸附反应(enzyme linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测组织匀浆上清液中细胞色素C(cytochrome-C,Cyt-C)的含量。分离损伤软骨组织中的软骨细胞,采用流式细胞仪分别检测各组细胞凋亡及线粒体膜电位变化;分别采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot,WB)检测软骨细胞中Caspase-3和Caspase-9在mRNA和蛋白水平上的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠软骨组织损伤明显;损伤软骨组织匀浆上清液中Cyt-C的表达水平上升(P<0.01);软骨细胞凋亡显著增加(P<0.01);软骨细胞线粒体细胞膜电位显著下降(P<0.01);Caspase-3和Caspase-9在mRNA及蛋白水平上的表达显著增加(均P<0.01)。与模型组比较,对照治疗组和治疗组KOA大鼠软骨组织损伤得到明显缓解;损伤软骨组织匀浆上清液中Cyt-C的表达水平降低(均P<0.01);软骨细胞凋亡显著降低(均P<0.01);软骨细胞线粒体细胞膜电位显著升高(均P<0.01);Caspase-3和Caspase-9在mRNA及蛋白水平上的表达显著降低(均P<0.01)。与对照治疗组比较,治疗组对KOA大鼠的治疗作用更加显著。结论:内热针能显著改善KOA大鼠的病理学变化,抑制KOA中软骨细胞的凋亡,这可能与其抑制Caspase-3和Caspase-9的表达密切相关。