筛选dbat启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建

被引：5

作者：

姚瑞枫

张蒙

张鹏

李书涛

陈丽

付春华

余龙江

机构：

[1] 华中科技大学生命科学与技术学院

来源：

生物技术通报 | 2009年 / 09期

关键词：

红豆杉细胞; dbat基因; 酵母单杂交文库; 结合蛋白; 转录调控;

D O I：

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2009.09.012

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与dbat基因启动子顺式元件结合的转录因子。首先,分离dbat启动子上的顺式作用元件,并进行3个拷贝的重复后,和报告质粒pHis 2.1连接构建诱饵载体pHis 2.1-dp3。然后,从茉莉酸甲酯诱导的红豆杉细胞中提取总RNA,以纯化出的mRNA为模板,依次完成ss cDNA和ds cDNA的合成,并将纯化的ds cDNA、线性化载体pGADT7-Rec2和诱饵载体pHis 2.1-dp3共转化酵母细胞Y187,各取100μl分别涂布于SD/-leu和SD/-leu/-trp平板,用于计算重组效率和转化效率,剩余转化液涂布于SD/-leu/-trp/-his/20 mM3-AT平板,用于筛选阳性克隆。结果表明,重组效率为1.49×106CFU/μg,共转化效率为1.93×105CFU/μg;对阳性克隆质粒进行酶切、测序分析,得到6个可编码结合蛋白的基因。以上工作为筛选调控紫杉醇合成关键酶基因dbat表达的转录因子奠定了基础。

引用

页码：117 / 120

页数：4

共 4 条

[1] 正常人肝细胞cDNA文库的构建及应用分析 [J].

栾慎顺 ;

张敬武 ;

刘恒贵 .

生物技术通报, 2007, (06) :135-137

[2]

Taxus sp. cell, tissue and organ cultures as alternative sources for taxoids production: a literature survey[J] . Mondher Jaziri,Abdesslam Zhiri,Yan-Wen Guo,Jean-Pierre Dupont,Koichiro Shimomura,Hiroki Hamada,Maurice Vanhaelen,Jacques Homès. &nbspPlant Cell, Tissue and Organ Culture . 1996 (1)

[3] 骨肉瘤cDNA文库的构建和筛选 [J].

邓少林 ;

权毅 ;

潘显明 ;

屈波 .

南方医科大学学报, 2007, (12) :1912-1914+1917

[4] 骨肉瘤cDNA文库的构建和筛选 [J].

邓少林 ;

权毅 ;

潘显明 ;

屈波 .

南方医科大学学报, 2007, (12) :1912-1914+1917

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