转染血管紧张素Ⅱ1型受体反义核苷酸对血管外膜成纤维细胞增殖的影响

为了评价转染血管紧张素Ⅱ 1型受体反义核苷酸对血管外膜成纤维细胞血管紧张素Ⅱ受体亚型mRNA表达 ,及细胞内核酸蛋白质的合成水平的作用。采用逆转录—聚合酶链反应克隆血管紧张素Ⅱ 1型受体cDNA序列 (476bp) ,将克隆cDNA反向插入PLXSN ,构建一完整的含血管紧张素Ⅱ 1型受体的质粒 ,并转染入培养的血管外膜成纤维细胞 ,逆转录—聚合酶链反应和免疫印迹鉴定其转染后血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA和蛋白表达。比较血管紧张素Ⅱ 10 7mol/L刺激 2 4h后的转染及非转染的血管外膜成纤维细胞血管素Ⅱ受体各亚型mRNA表达、细胞内核酸蛋白质的合成水平。转染组血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA和蛋白表达量显著减少 ,对照组相比差异显著(P <0 .0 1)。血管紧张素Ⅱ 10 7mol/L刺激 2 4h后 ,与对照组血管外膜成纤维细胞相比 ,转染组血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA表达明显减少 ,血管紧张素Ⅱ受体Ⅱ型mRNA表达明显增加 (P <0 .0 1) ,但两组间核酸和蛋白合成均无显著差异 (P >0 .0 5 )。提示反义核苷酸封闭后 ,血管外膜成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA表达显著抑制 ,同时血管紧张素Ⅱ受体Ⅱ型mRNA上调。单纯封闭血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA并不能有效阻断血管紧张素Ⅱ介导的血管外膜成纤维细胞生长。