牛呼吸道合胞体病毒G蛋白的截短表达与鉴定

被引：11

作者：

冯军科

薛飞

李娇

祖立闯

朱远茂

任宪刚

机构：

[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

来源：

中国生物工程杂志 | 2008年 / 28卷 / 12期

关键词：

牛呼吸道合胞体病毒; G基因; 克隆; 表达;

D O I：

10.13523/j.cb.20081205

中图分类号：

S858.23 [牛];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

将牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)G基因截短成2个片段G1和G2,然后以人工合成的牛呼吸道合胞体病毒G基因为模板,利用PCR分别扩增G1和G2基因片段,其大小分别为570 bp和308 bp。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后G1和G2基因片段均获得了表达,且为可溶性表达。利用Ni柱亲和层析法在非变性条件下纯化重组蛋白,经免疫印迹试验鉴定证明纯化的重组蛋白G1具有良好的抗原性和特异性,而重组蛋白G2无反应性。应用纯化的重组蛋白G1进行的间接ELISA与免疫印迹试验在国内牛血清中检测到了BRSV血清抗体。对建立BRSVG蛋白的血清学诊断方法和为开展BRSVG蛋白生物学功能的研究奠定了基础。

引用

页码：24 / 29

页数：6

共 19 条

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