一种改进的异硫氰酸胍法结合硅胶膜离心吸附柱提取孕妇外周血微量胎儿RNA的方法

被引：3

作者：

杨利丽

刘红英

杨和军

刘顺梅

机构：

[1] 潍坊医学院遗传学教研室

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2012年 / 28卷 / 02期

关键词：

异硫氰酸胍; 无创性产前诊断; RNA提取; ε血红蛋白基因; 胎盘特异表达基因4;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2012.02.006

中图分类号：

R440 []; R714.5 [胎儿];

学科分类号：

摘要：

孕妇外周血中存在胎儿RNA为无创性产前诊断提供了基础.但血液中富含RNA酶和微量胎儿RNA的特点,对从孕妇血浆中提取胎儿RNA带来困难.我们以ε血红蛋白基因和胎盘特异表达基因4(PLAC4)mRNA作为研究对象,用改进的异硫氰酸胍法结合硅胶膜离心吸附柱法探索孕妇外周血中胎儿微量RNA的提取方法,获得满意效果.30例孕妇和9例非孕妇外周血样品中总RNA经凝胶电泳测定显示3条带,分别为28S,18S和5.8S.其28S条带亮度为18S亮度的2倍.总RNA质量浓度(A260/A280)为1.97 g/L,光密度比值(A260-A320)/(A280-A 320)为1.86.30例孕妇外周血样本有7例提取到ε血红蛋白基因mRNA,ε血红蛋白基因mRNA的最小浓度为0.537μg/mL,最大浓度为1.79μg/mL,ε血红蛋白基因mRNA的浓度中位数为1.24μg/mL.30例孕妇外周血样本提取到PLAC4基因mRNA,浓度最小值为2.105×103 copies/mL,最大值为12.760×103 copies/mL,而9例非孕妇中均未提取到(P<0.01),浓度中位数为6.612×103 copies/mL.因此,改进的异硫氰酸胍法与硅胶膜离心吸附柱纯化法相结合,可有效抑制RNA降解,用于提取、纯化孕妇血液中微量胎儿RNA.

引用

页码：177 / 181

页数：5

共 5 条

[1] 改良手工显微切割法获取特定细胞提取高质量RNA [J].

周广彪 ;

胡盛平 ;

刘静文 ;

张可浩 ;

官兵 ;

吴名耀 ;

沈忠英 ;

杨捷生 .

中国生物化学与分子生物学报, 2006, (03) :252-257

[2] 母血中胚胎细胞特异性血红蛋白基因表达 [J].

王滨有 ;

许锬 ;

陈飞 ;

施霖 ;

段稳铭 ;

不详 .

中国公共卫生 , 2003, (09) :23-25

[3] 从血液中提取总RNA的一种快速高效方法 [J].

林明 ;

张页 ;

张沙 ;

周柔丽 .

中国生物化学与分子生物学报, 2002, (06) :134-135

[4] Circulating cell-free fetal messenger RNA levels after fetoscopic interventions of complicated pregnancies [J].

Tjoa, May Lee ;

Jani, Jacques ;

Lewi, Liesbeth ;

Peter, Inga ;

Wataganara, Tuangsit ;

Johnson, Kirby L. ;

Bianchi, Diana W. ;

Deprest, Jan A. .

AMERICAN JOURNAL OF OBSTETRICS AND GYNECOLOGY, 2006, 195 (01) :230-235

[5] Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum [J].

Lo, YMD ;

Corbetta, N ;

Chamberlain, PF ;

Rai, V ;

Sargent, IL ;

Redman, CWG ;

Wainscoat, JS .

LANCET, 1997, 350 (9076) :485-487

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