肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受PI3K/Akt通路调节

被引：9

作者：

张小丽 ^{[1
]}

高建 ^{[1
]}

贾茜 ^{[1
]}

邓涛 ^{[2
]}

机构：

[1] 重庆医科大学附属第二医院消化内科

[2] Toronto General Research Institute,University of Toronto,MG M,Toronto,Ontario,Canada

来源：

第三军医大学学报 | 2013年 / 35卷 / 02期

关键词：

肝细胞癌; 肿瘤细胞,培养的; 肿瘤干细胞; 表柔比星; 耐药性; PI3K/Akt;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2013.02.021

中图分类号：

R735.7 [肝肿瘤];

学科分类号：

100112 [医学生物化学与分子生物学];

摘要：

目的分离肝癌干细胞样细胞,初步探讨PI3K/Akt通路调节其对化疗药物阿霉素的敏感性。方法将人肝癌细胞株PLC、HepG2、Hep3B置于无血清条件培养基中培养,形成细胞球,选用PLC细胞株进行后续实验。采用流式细胞仪、克隆形成实验、SCID小鼠体内成瘤实验鉴定PLC细胞球(肝癌干细胞样细胞)的肿瘤干细胞特性。MTT法、流式细胞仪测定PLC细胞球对化疗药物阿霉素的敏感性。流式细胞仪分析加入PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002、阿霉素共同孵育细胞球后,其凋亡率的变化。Western blot法比较PLC细胞球、PLC贴壁细胞中p-Akt1(Ser473)蛋白分子表达量及加入抑制剂LY294002作用于细胞球后,p-Akt1(Ser473)、Akt1蛋白分子表达量的变化。结果肝癌干细胞标志物CD90在细胞球中的表达较贴壁细胞显著升高(P<0.01)。细胞球的克隆形成数目(123.00±28.48)为贴壁细胞(56.33±7.37)的2.18倍(P<0.05)。同样细胞数接种于SCID小鼠皮下7周后,细胞球的致瘤率明显大于贴壁细胞。以5μg/mL的阿霉素分别处理细胞球和贴壁细胞48 h后,细胞球的增殖率明显高于贴壁细胞[(71.83±12.30)%vs(45.68±5.95)%,P<0.05],凋亡率显著低于贴壁细胞[(11.73±3.77)%vs(41.22±6.73)%,P<0.01],而以阿霉素5μg/mL和LY294002共同孵育细胞球后,其凋亡率[(35.44±6.65)%]显著增加(P<0.01)。Western blot检测到细胞球的p-Akt1(Ser473)蛋白分子表达量显著高于贴壁细胞(P<0.01),加入抑制剂LY294002处理细胞球后,p-Akt1(Ser473)蛋白表达量明显降低(P<0.05),Akt1的表达量无明显变化(P>0.05)。结论肝癌干细胞样细胞对化疗药物阿霉素具有耐药性,其耐药机制与Akt信号通路第473位点磷酸化Akt1分子有关。

引用

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共 4 条

[1]

HepG2、Hep3B细胞中肿瘤干细胞相关标志分子的表达 [J].