自噬激活在抑制丙泊酚诱导的神经元凋亡中的作用

目的 探究自噬激活在丙泊酚诱导海马神经元凋亡中的作用。方法 取胎鼠提取分离原代海马神经元，随机分为对照组、丙泊酚组、雷帕霉素组与氯喹组。采用二甲氧唑黄比色法(XTT)和流式细胞术检测神经元凋亡，Western blot法检测自噬与凋亡相关蛋白表达。取老龄大鼠随机分为对照组、丙泊酚组、雷帕霉素组与氯喹组。以100 mg/kg丙泊酚连续麻醉1周，期间以50 mg/kg雷帕霉素和10 mg/kg氯喹治疗。采用Morris水迷宫检测大鼠认知功能，TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况，高尔基染色观察海马神经元自噬情况，Western blot法检测自噬与凋亡相关蛋白表达。结果 离体试验中，雷帕霉素逆转了丙泊酚造成的细胞凋亡。与丙泊酚组相比，雷帕霉素组微管相关蛋白轻链3Ⅱ/微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)与Beclin-1表达增加，但凋亡蛋白剪切的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)与Bax表达降低。在体研究中，与丙泊酚组相比，雷帕霉素组水迷宫逃避潜伏期减少，且雷帕霉素组TUNEL阳性细胞数与自噬小体数量减少。此外，雷帕霉素组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达降低，且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ与Beclin-1表达增加，Cleaved-caspase-3与Bax表达降低。但氯喹对自噬和凋亡相关蛋白没有影响。结论 雷帕霉素通过抑制mTOR信号活化，进一步激活了细胞自噬，改善了丙泊酚造成的神经元凋亡，提高了大鼠认知功能。