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- [3] Detection of Lactobacillus acidophilus in Fermented Material by Real-time Fluorescent Quantitative PCR[J]. Guo Zihao,Fang Hua,Xia Zhisheng,Zhu Xiaoshi,Sun Zhongchao,Yu Hanli,Xia Jiaji.Animal Husbandry and Feed Science. 2016(01)
乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法
被引：24
作者：
张娜娜
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刘洋
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俞漪
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赵渝
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窦同海
[3
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徐琼
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段文锋
[4
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翁史昱
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机构：
[1] 上海市质量监督检验技术研究院国家食品质量监督检验中心(上海)
[2] 上海师范大学生命与环境科学学院
[3] 复旦大学生命科学学院
[4] 上海市质量管理科学研究院(上海)
来源：
基金：
上海市自然科学基金;
关键词：
实时荧光定量PCR;
嗜酸乳杆菌;
定量;
检测;
D O I：
暂无
中图分类号：
TS275.4 [功能饮料];
O657.3 [光化学分析法（光谱分析法）];
学科分类号：
摘要：
目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chainreaction,PCR）检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果:该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3 pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11份样品进行检测,其中6份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×10～2～3.68×1～04 CFU/mL之间。结论:建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。
引用
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