双孢菇酪氨酸酶测活方法的改进及其抑制剂的筛选

对传统的酪氨酸酶活性测定的分光光度法(以多巴为底物,在475nm处比色)加以改进,使其灵敏度得以明显提高,同时确认了其反应的最佳条件和特征常数:即以L-酪氨酸为底物,于317nm处比色,pH6.5,在30℃下反应,测得酪氨酸酶Km=0.543mmol/L,Vmax=41.5U/min。利用此改进方法考察了苯甲酸、异Vc、EDTA、CA、H2O2、NaCl、环糊精及其组合对酪氨酸酶的抑制效果。结果发现,柠檬酸(CA)、苯甲酸、异Vc均为优良的酪氨酸酶抑制剂,抑制率均高于53%,另外,包含异Vc的各种二、三元组合效果普遍良好,抑制率均在75%以上,其中又以0.55%异Vc+1.6%CA+5%NaCl组合最佳,其抑制率高达86.8%。