大花蕙兰基因组DNA提取及RAPD反应条件探索

被引：15

作者：

李冬梅 ^{[1
]}

朱根发 ^{[2
]}

叶庆生 ^{[1
]}

机构：

[1] 华南师范大学生命科学学院广东省植物发育生物工程重点实验室

[2] 广东省农业科学院花卉研究所

来源：

热带亚热带植物学报 | 2006年 / 01期

关键词：

大花蕙兰; 基因组DNA提取; CTAB; RAPD;

D O I：

暂无

中图分类号：

S682.31 [兰科植物];

学科分类号：

摘要：

用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA,发现以改良CTAB法提取的DNA纯度高,产率也较高。以5’-GGTGCTCCGT-3(’BA440)为随机引物,并以大花蕙兰品‘种金杯(’Cymbidiumhybridiumcv.HiroshimaGoldenCu“pSunnyMoon”)的DNA为模板,对RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)反应体系进行了优化研究,结果表明,25μl反应体系中,Mg2+、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol/L、1.0U、0.20μmol/L、25ng和0.20mmol/L。扩增程序优化为:94℃预变性4min;94℃变性0.5min,37℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环;最后72℃延伸7min。

引用

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