人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1在Pichia pastoris酵母中重组表达研究

被引：3

作者：

李克勤

李春海

颜春洪

机构：

[1] 军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物室!北京,军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物室!北京,DepartmentofCancerBiology,MDAndersonCancerCenter,Houston,Texas,USA

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2001年 / 02期

关键词：

组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1; 酵母表达系统; 反向明胶酶谱;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2001.02.005

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质粒获得了该基因的全长序列 ,构建了 p PIC9/T1表达载体 ,电击法转化酵母 ,通过表型筛选和 PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入 Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS- PAGE表明表达量高达 40 mg/L培养上清 .用免疫印迹法确定了产物的正确性 ;同时 ,反向明胶酶谱法证明了重组蛋白具有抑制基质金属蛋白酶的活性 .

引用

页码：160 / 164

页数：5

共 5 条

[1] 人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达 [J].

颜春洪 ;

李春海 ;

田方 ;

朱运峰 ;

孙丽亚 .

中国生物化学与分子生物学报, 2000, (02) :194-199

[2]

Secretion,purification and activity of two recombinant peper endo-β-1,4-glucanase expressed in the yeast Pichia pastoris. F arraese L,Trainotti L,Gattolin S,Cadaoro G. FEBS Letters . 1998

[3]

Quantitative reverse zymography:analysis of picogram am ountsof m etalloproteinase inhibitors using gelatinase A and B reversezymograms. Oliver G W,Leferson JD,Stetler-Stevenson W G,Kleiner D E. Analytical Biochemistry . 1997

[4]

Cellular functions ofmetalloendoproteinases. Lennarz W J,Strittm atter W J. Biochimica et Biophysica Acta . 1991

[5] 肿瘤微血管生成的机制与肿瘤侵袭和转移 [J].

李春海 ;

李克勤 .

中华肿瘤杂志, 2000, (03) :5-7

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