重组人源抗HBsAg单链抗体的纯化及亲和常数测定

目的 :对融合 6×His标签的人源抗乙型肝炎表面抗原单链抗体的包涵体进行纯化和复性 ,并对复性产物的抗原结合性质进行鉴定。方法 :工程菌表达的包涵体裂解后 ,金属螯合亲合层析纯化 ,然后以尿素透析、盐酸胍透析和金属螯合亲和层析柱原位复性 3种方法进行复性 ;复性产物以免疫亲和层析精制 ,非竞争酶免疫法测定亲和常数结果 :盐酸胍透析复性产物的比活性最高 ,蛋白回收率为 (6 1 0 8± 1 4 5 ) % ;精制后的重组单链抗体的亲和常数为 (2 30± 0 32 )× 10 7L/mol。结论 :本株单链抗体可以应用优化的透析复性技术 ,在体外高效复性 ,其抗原结合性质不受N末端纯化标签的影响。