家蝇幼虫脂肪体cDNA文库的构建及初步鉴定

目的　构建家蝇幼虫cDNA文库。方法　以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌免疫诱导 2 4h后的家蝇三龄幼虫为实验材料 ,从其脂肪体中提取总RNA ,运用SMART(switchingmechanismat 5 ,endofmRNAtranscript)技术构建家蝇幼虫cDNA文库。结果　初步测定 ,原始文库的滴度为 1.34× 10 6pfu/ml,原始文库重组率为 98.9% ,文库扩增后滴度达 2 .4 0 8× 10 9pfu/ml。从扩增文库随机挑取 12个克隆进行PCR扩增鉴定 ,结果显示所选的 12个噬菌体克隆均含有重组的cDNA ,插入片段大小为 4 0 0bp～ 15 0 0bp之间。结论成功构建了家蝇幼虫cDNA文库。