淫羊藿甙诱导人骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化实验研究

目的:观察淫羊藿甙对人骨髓间充质干细胞(h MSCs)向软骨细胞诱导分化的作用。方法:骨髓样本取自广州中医药大学第一附属医院关节一科因骨关节炎行全髋关节置换手术的病人,用含有1m L肝素(100 U/m L)的注射器抽取骨髓5 m L,并立即送入实验室进行体外培养。收集体外增殖培养第3代的细胞,分5组:未诱导组、对照组、淫羊藿甙低剂量组、淫羊藿甙中剂量组、淫羊藿甙高剂量组。置于细胞培养箱培养,隔天换液1次,培养21天。甲苯胺蓝染色及SABC免疫组化法检测软骨细胞,并定量测定胶原α1m RNA表达水平。结果:甲苯胺蓝染色鉴定:淫羊藿甙高剂量组和对照组染色均可见胞浆成紫红色质,表明糖氨聚糖含量丰富,h MSCs向软骨细胞分化;淫羊藿甙低、中剂量组及未诱导组染色未见特征性紫红色异染,表明h MSCs未见明显软骨分化。Ⅱ型胶原SABC免疫组化法鉴定:淫羊藿甙高剂量组和对照组免疫组化染色后可见棕黄色胶原颗粒,淫羊藿甙高剂量组最为密集,表明Ⅱ型胶原含量多,h MSCs向软骨细胞分化显著;淫羊藿甙低、中剂量组见少量棕黄色胶原;未诱导组未见胶原染色。从荧光定量PCR检测结果分析,淫羊藿甙高剂量组、对照组Ⅱ型胶原相对表达量较高,2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。淫羊藿甙低、中剂量组Ⅱ型胶原相对表达量较低,2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。未诱导组无胶原表达。结论:淫羊藿甙可在体外诱导h MSCs分化为软骨细胞。