一株耐碳青霉烯类的阴沟肠杆菌的KPC酶检测

目的研究阴沟肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法临床分离到1株碳青霉烯耐药的阴沟肠杆菌 ZY1465。对该菌株进行药物最低抑菌浓度(MIC)测定、接合试验、质粒图谱分析、等电聚焦电泳、特异性 PCR 扩增和 DNA 序列分析以及外膜蛋白分析等。结果阴沟肠杆菌ZY1465对亚胺培南和美罗培南的 MIC 均为32μg/ml,对青霉素类、头孢菌素类、头孢西丁、氨曲南、喹诺酮类和氨基糖苷类等多种抗生素呈高水平耐药。接合试验使受体菌大肠埃希菌对亚胺培南和美罗培南的敏感性明显降低(MIC 由接合前的≤0.125μg/ml 变为接合后的2μg/ml)。质粒酶切图谱分析表明转移接合子的质粒与编码 blaKPC-2基因的质粒完全相同。等电聚焦显示阴沟肠杆菌ZY1465产等电点(pI)分别为5.4、6.7、7.3、7.8、7.9和8.6共6种β-内酰胺酶,转移接合子只产等电点6.7的1种β-内酰胺酶。特异性 PCR 扩增和测序证实该菌中存在 TEM-1、肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶2(KPC-2)、DHA-1、CTX-M-14、CTX-M-3和染色体 AmpC(等电聚焦电泳中未检测到)等耐药基因。外膜蛋白的尿素-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示阴沟肠杆菌 ZY1465有38 000蛋白条带的缺失。结论首次在国内分离到产 KPC-2型碳青霉烯酶的阴沟肠杆菌,多种β-内酰胺酶尤其是 KPC-2的产生合并外膜蛋白缺失引起阴沟肠杆菌 ZY1465对碳青霉烯类抗生素耐药。