应用正交实验法优化DNA重复序列的PCR扩增体系

被引：8

作者：

赵宏宇

蔡禄

赵秀娟

王晶妍

机构：

[1] 内蒙古科技大学生物与化学工程学院

来源：

内蒙古科技大学学报 | 2008年 / 04期

关键词：

PCR; 正交实验; 重复序列; 人遗传病;

D O I：

10.16559/j.cnki.2095-2295.2008.04.001

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

采用L9(34)正交实验法,对与人神经系统疾病相关的DNA重复序列PCR扩增体系中的模板DNA浓度、Taq酶浓度、引物浓度、dNTP浓度4种影响因素进行了优化筛选,发现引物浓度对扩增结果影响的显著性最大.在此基础上进行了引物浓度单因素实验,得到最优DNA重复序列PCR扩增体系在25μL反应体系中各组分的最适浓度分别为:模板3 ng/μL、Taq酶0.75 U、dNTP0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L.通过优化前后反应体系的对比,扩增目的产物的量均有较大程度的提高.该优化体系的建立为进一步研究与人遗传病相关的DNA重复序列的结构特性及阐明该类遗传疾病的分子机理奠定了基础.

引用

页码：346 / 350

页数：5

共 9 条

[1] 与人遗传病相关（CTG）_n·（CAG）_n重复序列的分子克隆 [J].

毛爱华 ;

赵秀娟 ;

蔡禄 .

内蒙古大学学报(自然科学版), 2008, (01) :50-55

[2] 辣椒ISSR-PCR体系优化 [J].

吴小丽 ;

王述彬 ;

曹碚生 ;

刘金兵 ;

潘宝贵 .

江西农业大学学报, 2007, (02) :288-291

[3] 正交法用于真菌微卫星PCR体系优化 [J].

杨艳秋 ;

贺丹 ;

王爽 ;

郭亮 ;

张宇 ;

横山耕治 ;

王丽 .

吉林大学学报(医学版), 2006, (06) :1108-1111

[4] 与人遗传病相关（GCCT）_n·（CAGG）_n重复序列的分子克隆 [J].

蔡禄 ;

王晶妍 ;

赵秀娟 .

包头钢铁学院学报, 2006, (02) :194-196

[5] 正交实验法在PCR反应条件优化中的应用 [J].

杨水云 ;

李续娥 ;

吴明宇 ;

孙飞龙 ;

李剑君 .

生物数学学报, 2005, (02) :202-206

[6] 红松ISSR-PCR实验系统影响因素 [J].

冯富娟 ;

王凤友 ;

刘彤 .

植物学通报, 2004, (03) :326-331

[7]

DNA structures, repeat expansions and human hereditary disorders[J] . Sergei M Mirkin.Current Opinion in Structural Biology . 2006 (3)

[8]

Triplet repeat DNA structures and human genetic disease: dynamic mutations from dynamic DNA[J] . Richard R. Sinden,Vladimir N. Potaman,Elena A. Oussatcheva,Christopher E. Pearson,Yuri L. Lyubchenko,Luda S. Shlyakhtenko.Journal of Biosciences . 2002 (1)

[9] DNA repeat expansions and human disease [J].

Usdin, K ;

Grabczyk, E .

CELLULAR AND MOLECULAR LIFE SCIENCES, 2000, 57 (06) :914-931

← 1 →