抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

被引：5

作者：

侯霄煜 ^{[1
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温红玲 ^{[1
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闫玉芬 ^{[1
]}

宋艳艳 ^{[1
]}

许洪芝 ^{[1
]}

赵丽 ^{[1
]}

李凤琴 ^{[2
]}

机构：

[1] 山东大学公共卫生学院卫生检验研究所

[2] 不详

来源：

山东大学学报(医学版) | 2009年 / 47卷 / 10期

基金：

国家高技术研究发展计划(863计划);

关键词：

赭曲霉犊素A; 单克隆抗体; 细胞融合; 酶联免疫吸附试验;

D O I：

暂无

中图分类号：

R115 [卫生检验];

学科分类号：

摘要：

目的制备抗赭曲霉毒素A(OA)的单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定,在此基础上建立竞争抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)用于OA的检测。方法采用小剂量长周期的免疫方案,以OA-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合法获得分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法大量制备McAb,以OA为竞争抗原,建立检测OA的竞争抑制ELISA。结果OA-BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1:512000,与BSA有强烈的交叉反应。细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,抗OA-BSA的McAb与BSA的交叉反应率仅为3.5%,对分泌抗OA-BSA特异的McAb的细胞株经3轮克隆化,抗体分泌阳性率达到100%,建立了1株能稳定分泌抗OA-BSAMcAb的杂交瘤细胞株,竞争抑制法进一步证明了该抗体是特异针对OA的,腹水诱生法制备了大量的McAb。竞争抑制ELISA线性范围为0.24～125ng/mL,线性方程y=-0.1132logx+0.9016,相关系数r=0.98,最低检出浓度为0.24ng/mL。样品的加标回收率为97.07%～107.83%。结论获得了分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,建立了OA检测的简单、灵敏、高效的ELISA检测方法。

引用

页码：60 / 63

页数：4

共 9 条

[1] ELISA法检测赭曲霉毒素A的改进研究 [J].

时瑾 ;

黄飚 ;

孙蔚榕 ;

张珏 ;

赵晓联 .

食品科学, 2007, (08) :425-428

[2] 赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究 [J].

江涛 ;

李凤琴 ;

王环宇 ;

田静 ;

高秀芬 ;

宫慧之 ;

王玉平 ;

计融 ;

不详 .

中国公共卫生 , 2004, (05) :48-50

[3] 抗赭曲霉素A单克隆杂交瘤细胞系的建立及特性 [J].

江涛 ;

王环宇 ;

高秀芬 ;

王玉平 ;

宫慧之 ;

田静 ;

李凤琴 ;

计融 .

中国食品卫生杂志, 2004, (01) :14-17

[4] 两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定 [J].

赵丽 ;

计融 ;

王健伟 ;

韩春卉 ;

于修平 ;

董小平 ;

洪涛 .

中华实验和临床病毒学杂志, 2003, (02) :34-37

[5] 分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 [J].

张志东 ;

王景琳 ;

尹世兴 ;

朱彤霞 ;

陈必芳 ;

宋学敏 .

中国兽医科技, 1993, (12) :48-49+54

[6] Ultrasensitive electrochemical immunosensor for ochratoxin A using gold colloid-mediated hapten immobilization [J].

Liu, Xue-Ping ;

Deng, Ya-Juan ;

Jin, Xiao-Yong ;

Chen, Li-Guo ;

Jiang, Jian-Hui ;

Shen, Guo-Li ;

Yu, Ru-Qin .

ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, 2009, 389 (01) :63-68

[7]

Enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold immunoassay for ochratoxin A: investigation of analytical conditions and sample matrix on assay performance[J] . Xiang-Hong Wang,Tao Liu,Na Xu,Yan Zhang,Shuo Wang.Analytical and Bioanalytical Chemistry . 2007 (3)

[8]

Direct competitive ELISA based on a monoclonal antibody for detection of aflatoxin B 1 . Stabilization of ELISA kit components and application to grain samples[J] . Anna Yu Kolosova,Won-Bo Shim,Zheng-You Yang,Sergei A. Eremin,Duck-Hwa Chung.Analytical and Bioanalytical Chemistry . 2005 (1)

[9] Validation of an ELISA test kit for the detection of ochratoxin A in several food commodities by comparison with HPLC [J].

Zheng, ZM ;

Hanneken, J ;

Houchins, D ;

King, RS ;

Lee, P ;

Richard, JL .

MYCOPATHOLOGIA, 2005, 159 (02) :265-272

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