人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

被引：11

作者：

高云

黄宇烽

夏欣一

马百坤

机构：

[1] 南京军区南京总医院生殖遗传研究室,南京军区南京总医院生殖遗传研究室,南京军区南京总医院生殖遗传研究室,南京军区南京总医院生殖遗传研究室南京,南京,南京,南京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2003年 / 06期

关键词：

前列腺素D合成酶; 酵母表达系统; 金属亲合层析; 糖基化;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2003.06.014

中图分类号：

Q786 [基因的表达];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合 ,使其紫外吸收波谱发生红移

引用

页码：757 / 762

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共 4 条

[1]

人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达 [J].