水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR快速检测鉴定

被引：32

作者：

廖晓兰

朱水芳

赵文军

罗宽

漆艳香

机构：

[1] 湖南农业大学植物保护学院

[2] 国家质检总局动植物检疫实验所

[3] 湖南农业大学植物保护学院长沙

[4] 北京

[5] 长沙

来源：

微生物学报 | 2003年 / 05期

关键词：

水稻白叶枯菌; 水稻细菌性条斑菌; 实时荧光PCR; 检测; 鉴定;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2003.05.013

中图分类号：

S435.11 [稻病虫害];

学科分类号：

090401 ; 090402 ;

摘要：

成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行实时荧光PCR。结果表明 ,两个特异性探针能分别特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其它参考菌不产生荧光信号。检测的绝对灵敏度是 3 0 .6fg μL质粒DNA和 1 0 3CFU mL的菌悬浮液 ,相当于 1个细菌细胞的基因 ,比常规PCR电泳检测高约 1 0 0倍 ,相对灵敏度为 1 0 5CFU mL。整个检测过程只需 2h ,完全闭管 ,降低了污染的机会 ,无需PCR后处理。用这两个特异性探针分别对自然感染白叶枯菌和条斑菌的叶片DNA提取液和种子浸泡液进行实时荧光PCR ,结果均可特异性检测到目标菌的存在并完全可将两种病原细菌区分开来 ,且只需 0 3g叶片和 1 0g种子

引用

页码：626 / 634

页数：9

共 6 条

[1] 植原体TaqMan探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立 [J].

廖晓兰 ;

朱水芳 ;

陈红运 ;

黄文胜 ;

罗宽 ;

赵文军 ;

马荣群 ;

朱建裕 .

植物病理学报, 2002, (04) :361-367

[2] 恶性疟原虫荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立 [J].

江晓玲 ;

李明 ;

徐伟文 ;

毕惠祥 ;

程钢 ;

李虎 ;

诸欣平 .

中华检验医学杂志, 2000, (02)

[3]

应用于水稻白叶枯病菌检测的探针和引物序列[P]. 朱水芳;廖晓兰;赵文军.中国专利:CN1524964A,2004-09-01

[4]

精编分子生物学实验指南[M]. 科学出版社 , (美)F.奥斯伯（FrederickM.Ausubel）等著, 1998

[5]

Detection of Xanthomonas oryzae pv. oryzae in artificially inoculated and naturally infected rice seeds and plants by molecular techniques[J] . N. Sakthivel,C. Mortensen,S. Mathur.Applied Microbiology and Biotechnology . 2001 (3-4)

[6]

Real-time PCR for one-hour on-site diagnosis of Pierces disease of grape in early season asymptomatic vines. Schaad NW,Opgenorth D,Gansh P. Phytopathology . 2002

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