利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系

被引：118

作者：

谢运海

夏德安

姜静

林萍

机构：

[1] 东北林业大学林学院

[2] 黑龙江省林业科学院

来源：

分子植物育种 | 2005年 / 03期

关键词：

正交设计; ISSR-PCR; 水曲柳;

D O I：

暂无

中图分类号：

S792.41 [</a>];

学科分类号：

摘要：

利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20滋l)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA50￣200ng,dNTP0.15mmol/L,引物0.3滋mol/L。最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。

引用

页码：445 / 450

页数：6

共 6 条

[1] An improved procedure for the isolation of nuclear DNA from leaves of wild grapevine dried with silica gel [J].