弗氏中华根瘤菌基因文库的构建及与耐盐有关DNA片段的分离

被引：3

作者：

孙洪红

高为民

杨苏声

机构：

[1] 中国农业大学生物学院微生物学系

[2] 中国农业大学生物学院微生物学系北京

[3] 北京

来源：

农业生物技术学报 | 1996年 / 03期

关键词：

弗氏中华根瘤菌; 基因文库; 耐盐;

D O I：

暂无

中图分类号：

S188 [农业生物工程];

学科分类号：

071007 ; 0828 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以耐盐的弗氏中华根瘤菌（Sinorhizobium fredii）RT19菌株为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶EcoRI的部分酶解,利用电洗脱方法回收得到15～25kb大小的DNA片段.用QIAGEN-tip100试剂盒方法,提取并纯化质粒pLAFRI,用EcoRI将其切成线状.然后用T4 DNA连接酶将回收片段与线性载体连接,并利用包装蛋白进行包装,感染大肠杆菌（Esherichia coli）SP17.1,构建了RT19的基因文库.以固体亚硝基胍作为诱变剂,在0.4mol·L-1NaCI的条件下,从2500个菌落中筛选得到了5株RT19的盐敏感突变株.以其中稳定的突变株RC3-3作为受体菌,在辅助质粒pRK2013的协助下,将RT19的DNA片段转移到RC3-3中.在含有四环素和盐的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆.提取其重组质粒,用EcoRI完全酶切,得到15～25kb的外源DNA片段.

引用

页码：287 / 292

页数：6

共 3 条

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