利用体细胞核移植技术生产转基因牛

被引：20

作者：

龚国春

戴蕴平

樊宝良

朱化彬

王莉莉

王海平

汤波

刘颖

李荣

万荣

黄银花

李宁

机构：

[1] 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室

[2] 中国农业科学院畜牧研究所

[3] 北京基因达科技公司

[4] 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京

[5] 北京

来源：

科学通报 | 2003年 / 24期

关键词：

转基因; 体细胞; 核移植; 绿色荧光蛋白; 牛;

D O I：

暂无

中图分类号：

S823.3 [];

学科分类号：

090501 ;

摘要：

通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚发育率为49.1％.选择第7天转基因囊胚17枚移入17头同期发情的受体牛子宫角内,共有5头受体牛妊娠,妊娠率为29.4％.经过正常的体内发育,有3头转基因克隆牛出生,产犊率为17.6％.PCR和Southern检测结果表明,3头转基因克隆牛的基因组中都整合有外源目标基因.并且,绿色荧光蛋白在转基因克隆牛的耳部皮肤组织以及从耳部皮肤组织分离出的成纤维细胞中均有表达.上述结果显示,通过体细胞核移植技术可以有效生产转基因牛;所构建的双标记选择载体可以有效筛选出转基因细胞和转基因克隆胚胎,应用于转基因克隆动物的生产,确保所培育的克隆动物均为转基因动物.

引用

页码：2528 / 2533

页数：6

共 6 条

[1] 以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎 [J].

龚国春 ;

戴蕴平 ;

樊宝良 ;

朱化彬 ;

王海平 ;

王莉莉 ;

方昌阁 ;

万荣 ;

刘颖 ;

李荣 ;

李宁 .

中国科学(C辑:生命科学), 2003, (06) :532-538

[2] 双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立 [J].

龚国春 ;

戴蕴平 ;

樊宝良 ;

赵春江 ;

王莉莉 ;

王海平 ;

郑敏 ;

李宁 .

自然科学进展, 2002, (12) :88-90

[3] 体细胞克隆法生产绵羊转基因囊胚 [J].

安晓荣 ;

苟克勉 ;

陈永福 ;

不详 .

科学通报 , 2001, (10) :820-823+883

[4]

Generation of Dwarf Goat ( Capra hircus ) Clones Following Nuclear Transfer with Transfected and Nontransfected Fetal Fibroblasts and In Vitro-Matured Oocytes1[J] . C. L. Keefer,H. Baldassarre,R. Keyston,B. Wang,B. Bhatia,A. S. Bilodeau,J. F. Zhou,M. Leduc,B. R. Downey,A. Lazaris,C. N. Karatzas.Biology of Reproduction . 2001 (3)

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[6]

Transgenic Dairy Cattle: Genetic Engineering on a Large Scale[J] . R.J. Wall,D.E. Kerr,K.R. Bondioli.Journal of Dairy Science . 1997 (9)

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