抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体基因的克隆、表达及其生物学活性(英文)

被引：4

作者：

赵宝华

许崇波

边艳青

段相林

朱平

机构：

[1] 河北师范大学生命科学学院,宁夏大学生物工程系,河北师范大学生命科学学院,河北师范大学生命科学学院,中国人民解放军军需大学军事兽医研究所石家庄,银川,石家庄,石家庄,长春

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2003年 / 06期

关键词：

A型产气荚膜梭菌; α毒素; 单链抗体小分子; 基因克隆和表达; 生物学活性;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2003.06.002

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

应用RT PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞株 1A8中 ,分别扩增出抗体VH 和VL 基因 ,用linker (Gly4Ser) 3 基因 ,将VH 和VL 基因连接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并将其克隆至pGEM T载体中 .经核苷酸序列分析证实 ,VH 和VL 基因及linker基因拼接正确 ,ScFv 1A8基因全长为 72 6bp ,编码2 4 2个氨基酸 ,VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ (A)和轻链κⅣ家簇 .将ScFv 1A8基因克隆至表达载体pHOG2 1中 ,构建了重组质粒pHOG 1A8,然后转化至受体菌XL1 BLUE中 ,得到重组菌株XL1 BLUE (pHOG 1A8) .ELISA检测和SDS PAGE分析表明 :经IPTG诱导后所表达的目的蛋白存在于重组菌株XL1 BLUE (pHOG 1A8)的胞周质中 .经薄层扫描分析 :重组菌株XL1 BLUE(pHOG 1A8)的蛋白表达产物占菌体可溶性蛋白的 1 2 % ,其相对分子量约为 31kD .ScFv的生物学活性研究表明 ,ScFv蛋白不但具有中和磷脂酶C的活性 ,而且还能够对致死性腹腔攻击的小鼠产生良好的被动保护作用

引用

页码：690 / 697

页数：8

共 3 条

[1] 传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达 [J].