bFGF与VEGF抗原表位筛选及复合肽的表达鉴定

目的筛选bFGF与VEGF抗原表位,构建复合肽进行原核表达,并对复合肽免疫原性及抑瘤效果进行研究。方法生物信息学方法分别预测bFGF和VEGF抗原表位,筛选优势表位,通过柔性Linker连接各表位构建复合肽,合成引物,重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)方法合成复合肽cDNA序列,克隆入原核表达载体pET32a进行表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-Blot鉴定,Ni-NTA柱纯化复合肽并免疫小鼠,间接ELISA法测定抗bFGF抗体和抗VEGF抗体滴度。构建黑色素移植瘤C57BL/6小鼠模型,研究复合肽免疫后肿瘤生长情况。结果生物信息学方法筛选获得3个bFGF表位和2个VEGF表位连同一个噬菌体多肽库筛选表位构建成复合肽,SOEPCR方法成功合成复合肽cDNA序列,构建原核表达载体表达bFGF与VEGF复合肽,纯化的复合肽免疫小鼠产生抗bFGF抗体和抗VEGF抗体;并且体内能有效抑制黑色素瘤生长。结论生物信息学方法筛选bFGF和VEGF获得的抗原表位构建的复合肽在体内同时激发抗bFGF抗体和抗VEGF抗体,并且能抑制肿瘤的生长,为研究bFGF与VEGF表位的抗肿瘤作用奠定基础。