小分子干扰RNA介导RhoA沉默优化骨髓间充质干细胞的培养

背景:以往骨髓间充质干细胞的培养方法存在衰老和分化率低等问题。目的:检测是否可以通过沉默RhoA基因的方法优化骨髓间充质干细胞培养。方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,经小分子干扰RNA转染以沉默RhoA基因表达,分为3组培养:干细胞组(未转染小分子干扰RNA)、经随机打乱顺序的小分子干扰RNA转染干细胞组、经小分子干扰RNA转染的干细胞组。用RT-PCR,Westernblot检测骨髓间充质干细胞在转染前后RhoA基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、MTT比色法观察细胞生长的优化作用,采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果与结论:与干细胞组、经随机打乱顺序的小分子干扰RNA转染干细胞组比较,经小分子干扰RNA转染的干细胞组RhoA基因和蛋白表达量明显降低(P<0.05),细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多(P<0.05)。说明通过沉默RhoA基因的方法可以促进骨髓间充质干细胞增殖,优化培养方法。