应用巢式聚合酶链反应和测序检测肺炎支原体23S rRNA中点突变

被引：8

作者：

辛德莉 ^{[1
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糜祖煌 ^{[2
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韩旭 ^{[3
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秦玲 ^{[2
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李靖 ^{[1
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刘禧杰 ^{[1
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马少杰 ^{[1
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侯安存 ^{[1
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李贵 ^{[1
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机构：

[1] 首都医科大学附属北京友谊医院儿科

[2] 无锡市克隆遗传技术研究所

[3] 中国石油天然气集团公司中心医院儿科

来源：

中华儿科杂志 | 2008年 / 07期

关键词：

支原体,肺炎; 抗药性; RNA,核糖体,23S; 聚合酶链反应;

D O I：

暂无

中图分类号：

R686 [筋腱、韧带、滑囊疾病及损伤];

学科分类号：

100220 [骨科学];

摘要：

目的建立快速检测肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)耐药性的实验方法并应用于临床以了解 MP 耐药现状。方法应用巢式 PCR 直接检测咽拭子标本 MP-23S rRNA 基因并对扩增产物进行电泳检测或 DNA 测序分析;通过 MP 培养及体外药物敏感性试验测定临床分离株的红霉索最小抑菌浓度,以验证23S rRNA 基因检测结果的可靠性。结果 200例临床标本经 MP-IgM抗体、咽拭子 MP 种特异性16S rRNA 基因巢式 PCR 扩增和 MP 分离培养测定证实为 MP 64例。应用巢式 PCR 技术扩增 MP-23S rRNA 基因,并对扩增产物进行测序,将基因序列与基因库中 MP 标准株基因序列进行比较,与标准株序列相同的共计26例,其余38例存在23S rRNA 点突变:35例在2063位点发生了 A 到 G 的点突变,1例在2063位点有 A 到 C 的点突变,2例在2064位点有 A 到 G 的点突变;耐药率为59.4%。MP 耐药基因检测方法灵敏度达10～2 ccu/ml,MP 培养及药物敏感性试验证实23S rRNA 基因检测结果可靠。结论建立的 MP 耐药基因检测方法能直接检测临床标本中的 MP 耐药基因。59%的受检标本23S rRNA 基因发生点突变。

引用