槟榔植原体膜蛋白基因的克隆及其抗血清制备

被引：11

作者：

杨文君 ^{[1
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余乃通 ^{[2
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张雨良 ^{[2
]}

王健华 ^{[2
]}

刘志昕 ^{[2
]}

机构：

[1] 雅安职业技术学院

[2] 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

来源：

热带作物学报 | 2014年 / 35卷 / 11期

关键词：

槟榔植原体; 膜蛋白基因; 原核表达; 抗血清制备;

D O I：

暂无

中图分类号：

S667.9 [其他];

学科分类号：

090201 [果树学];

摘要：

根据实验室测得的槟榔植原体膜蛋白基因(Ac Pmp)序列设计1对特异引物mp-FP/mp-RP,以病样槟榔总DNA为模板扩增该Ac Pmp的编码区并连接到p MD19T simple中间载体。将测序正确的阳性菌提取质粒p MD19T-Ac Pmp,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后回收Ac Pmp片段,然后以正确的编码框连接到原核表达载体p ET32a(+),转化Escherichia coli BL21感受态细胞。含有p ET32a-Ac Pmp的BL21表达菌经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,在30℃,0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,可产生部分可溶性的融合蛋白。利用Ni2+-NTA亲和层析柱法进行纯化并获得高纯度的可溶性融合蛋白。将纯化后的融合蛋白多次免疫家兔,取其抗血清,以融合蛋白(1∶10 000稀释)作抗原,间接ELISA法测定抗血清效价大于125 000。Western Blot杂交结果表明槟榔植原体膜蛋白抗血清能与融合蛋白特异性结合。

引用

页码：2243 / 2248

页数：6

共 12 条

[1]

Phytoplasmas and their interactions with hosts [J].