盐单胞菌C6与耐盐有关DNA片段的克隆和序列分析

提取盐单胞菌（ Ｈａｌｏｍｏｎａｓ）Ｃ６ 的总ＤＮＡ，用Ｓａｕ３ＡⅠ部分酶切，回收１５ ～３０ ｋｂ 的ＤＮＡ 片段，以ｐＬＡＦＲ３ 为载体在大肠杆菌（ Ｅｃｏｌｉ）ＤＨ５α中构建了该菌的基因文库。以Ｃ６ 的基因文库为供体，以费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ） 盐敏感菌株ＲＣ３ ３ｒ 为受体，在辅助质粒ｐＲＫ２０１３ 的协助下进行三亲本杂交，在选择培养基上筛选到接合子ＲＷＨ１５ 和ＲＷＨ１７ 。质粒检测表明，这两个接合子分别含有重组质粒ｐＷＨ１５ 和ｐＷＨ１７ 。通过三亲本杂交和功能互补的方法，对质粒ｐ ＷＨ１５ 进行两次亚克隆，最终得到３２ ｋｂ 的ＤＮＡ 片段。经检测，该片段能使ＲＣ３ － ３ ｒ 恢复耐盐性。通过ＤＮＡ 测序及开放阅读框架（ＯＲＦｓ） 分析，发现该片段上有４ 个开放阅读框架，其功能有待于进一步研究。