3种植物花螺原体的分离及其基本特性

【目的】调查我国植物花上的螺原体的存在,搜集我国的螺原体资源,并研究它们的基本生物学特性。【方法】常规螺原体分离、培养方法,应用暗视野显微镜和透射电子显微镜观察螺原体形态,根据16S rDNA和ITS序列构建系统发育树研究螺原体分离菌株可能的分类地位。【结果】分别从油菜(Brassica napus)、杜鹃(Rhododendron simsii)、红花酢浆草(Oxalis corymbosa)3种植物花表分离到4株螺原体CNR-1和CNR-2、CNA-1、CRW-1,对其形态、部分生理生化特性及分子生物学特性进行了初步研究。这4株螺原体在R-2液体培养基中生长良好,都能通过孔径为0.22μm的微孔滤膜;在R-2固体培养基上呈圆形或颗粒状菌落,菌落直径约50～600μm;在生长的某个阶段可呈典型的螺旋状,菌体直径为37.04～370.40nm,长度约0.89～11.88μm;它们都能利用葡萄糖作为碳源,不能利用尿素;在不含胎牛血清的R-2培养基中,它们都不能生长;菌株CNR-1、CNA-1能强烈代谢精氨酸,而CNR-2和CRW-1不能代谢精氨酸;在氨苄青霉素钠浓度高达2000U/mL的R-2培养基中,分离菌株生长良好。根据16S rDNA序列构建的系统发育树显示,分离菌株CNR-1和CNR-2、CNA-1与蜜蜂螺原体Spiroplasma melliferum聚类较近,而CRW-1与S.clarkii聚类较近;根据ITS序列构建的系统发育树显示,CRW-1形成一个单独的分枝,其它3个菌株仍与S.melliferum聚类。【结论】以上结果初步表明,分离菌株CNR-1和CNR-2、CNA-1极有可能是Spiroplasma melliferum,而CRW-1可能是一个新的螺原体种,但还需要血清学试验进一步验证。