重组苦荞麦过敏蛋白TBa的原核表达及其免疫活性鉴定

被引：21

作者：

王岚

李玉英

蔡桂红

张政

王转花

机构：

[1] 山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2006年 / 04期

关键词：

苦荞麦; 过敏蛋白; 原核表达; 免疫活性;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2006.04.010

中图分类号：

S517 [荞麦]; S567.9 [其他药用作物];

学科分类号：

摘要：

TBa[tartary buckwheat allergen]是苦荞麦中的一种主要过敏蛋白.根据长度为585bp的TBacDNA序列,以pET-28a为表达载体并选择合适的酶切位点合成上、下游引物,采用基因克隆技术构建重组表达载体pET-28a-TBa.进一步将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.从而获得以包涵体形式存在的TBa目的蛋白.该目的蛋白经Ni2+-NTA琼脂糖柱亲和纯化及SDS-PAGE分析显示,纯度达到95%以上.用透析复性的方法将目的蛋白重折叠,其复性产率可达到约68%.Western印迹证实,目的蛋白N端带有6个组氨酸标签.ELISA检测表明,通过基因重组及表达获得的重组苦荞麦过敏蛋白,与天然苦荞种子中的该蛋白具有相似的免疫学活性,与荞麦过敏病人血清中的IgE有特异性的结合.

引用

页码：308 / 312

页数：5

共 8 条

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