柴胡ISSR-PCR反应体系的建立与优化

被引：22

作者：

隋春 ^{[1
]}

魏建和 ^{[1
]}

陈士林 ^{[1
]}

杨新全 ^{[2
]}

杨成民 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国医学科学院·中国协和医科大学药用植物研究所

[2] 中国医学科学院·中国协和医科大学药用植物研究所海南分所

来源：

时珍国医国药 | 2008年 / 08期

关键词：

柴胡; 基因组DNA提取; ISSR-PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R284 [中药化学];

学科分类号：

100804 [中药化学];

摘要：

目的建立适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系;筛选适宜引物,并确定最佳退火温度。方法CTAB法提取叶片DNA,通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系为25μl总体积中含有1×Taq酶缓冲液,2.0 mmol/LMgC l2,各0.15 mmol/L的dNTPs,0.3μmol/L引物,1.5 UTaq酶(上海生工),20 ng模板DNA,2%去离子甲酰胺。在100条引物中筛选出30条扩增条带清晰且条带数目较多的引物,最佳退火温度为49.9～63.6℃(因引物不同而异)。结论建立了柴胡ISSR-PCR反应体系,筛选出30条引物并确定了最佳退火温度,为应用ISSR技术鉴定柴胡种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。

引用

页码：1837 / 1839

页数：3

共 8 条

[1]

应用RAPD和ISSR分子标记构建茶树回交1代部分遗传图谱 [J].