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南极深海沉积物宏基因组DNA中低温脂肪酶基因的克隆、表达及性质分析
被引：14
作者：
张金伟
曾润颖
机构：
[1] 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室
来源：
关键词：
南极深海沉积物;
宏基因组;
低温脂肪酶;
克隆与表达;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q78 [基因工程（遗传工程）];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
从南极普利兹湾深海900米深的沉积物中提取获得宏基因组DNA,并通过设计引物,从中克隆到全长为948bp的低温脂肪酶(lip3)开放阅读框完整序列,该基因编码一个由315个氨基酸残基组成、预计分子质量为34.557ku酶蛋白(Lip3);氨基酸序列上的GFGNS(GXGXS)和G-N-S-M-G(GXSXG)在许多脂肪酶中有很高的保守性,它们是水解机制所必需的序列,也是丝氨酸水解酶中最保守的序列.构建了lip3基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得表达,采用镍离子亲和层析柱对表达的酶蛋白Lip3进行纯化,得到约35ku蛋白条带,酶学性质的分析表明,该酶的最适作用温度为25℃,在0℃时表现为最高活力的22%,最适pH值为8.0,对热敏感,35℃热处理60min剩余酶活为10%,以硝基苯棕榈酸酯为底物,Lip3的酶促反应常数Km值随着反应温度的升高而升高,是典型的低温酶.
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页码：1207 / 1214
页数：8
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