人肝细胞生长因子(hdHGF)基因在毕赤酵母中的分泌表达

被引：5

作者：

邓兵兵

方宏清

薛冲

赵洪亮

刘志敏

机构：

[1] 军事医学科学院生物工程研究所!北京,军事医学科学院生物工程研究所!北京,军事医学科学院生物工程研究所!北京,军事医学科学院生物工程研究所!北京,军事医学科学院生物工程研究所!北京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2001年 / 05期

关键词：

肝细胞生长因子; 巴斯德毕赤酵母; 分泌表达;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2001.05.010

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达 .以人胎盘mRNA为模板 ,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段 .将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115,筛选mut+ 表型 ,经甲醇诱导可实现rhdHGF的分泌表达 .经摇瓶培养筛选出 4株表达水平较高的酵母工程菌株 ,SDS PAGE分析和Western印迹试验表明 ,产物分子量约为80kD ,5L发酵罐高密度培养已使生物量达 13 5g L(干重 ) ,发酵液上清总蛋白量为 8 0g L ,电泳结果表明rhdHGF表达水平为总蛋白的 12 3 % .

引用

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