对粉纹夜蛾高毒力cry9Ea基因的克隆及表达

被引：5

作者：

孙永祥 ^{[1
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刘廷辉 ^{[2
]}

郭巍 ^{[1
,2
]}

王立光 ^{[2
]}

孙伟明 ^{[1
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机构：

[1] 河北农业大学生命科学学院

[2] 河北农业大学植物保护学院,河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心

来源：

微生物学报 | 2010年 / 50卷 / 05期

关键词：

苏云金杆菌; cry9Ea7基因; 基因克隆; 基因表达; 杀虫活性;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2010.05.014

中图分类号：

S476.1 [];

学科分类号：

0904 ;

摘要：

【目的】从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Ea基因,并研究其表达和杀虫活性。【方法】以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因,然后以菌株Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA/R9EA进行PCR扩增全长基因。【结果】将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆菌重组表达质粒pETcry9Ea。转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130kDa的蛋白,再将cry9Ea7基因连接到穿梭载体pSXY422b,电激转化HD73-(cry-),得到工程菌BioHD9Ea7,提取Cry9Ea7晶体蛋白,并进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry9Ea7蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)初孵幼虫具有高毒力,LC50为0.044μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫未显示活性。【结论】克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Ea7,并成功构建了工程菌BioHD9Ea7。

引用

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页码：601 / 605

页数：5

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