葛根素对肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究葛根素对肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:选取120只实验用大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物100 mg·kg-1治疗组、葛根素(100,50,25 mg·kg-1)治疗组;采用夹闭双侧肾蒂血管45 min后恢复血流再灌注的方法制备肾缺血再灌注大鼠模型;再灌注后立即通过ip给药,每天1次,疗程2周。治疗完成后,称量体重和肾脏质量并计算肾脏指数,测定血清中尿素氮（BUN）,血肌酐（SCr）,尿酸（UA）含量,PAS染色法观察肾脏组织形态学变化;末端标记法（TUNEL）染色法观察细胞凋亡状况并计算凋亡指数（AI）;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定肾脏组织蛋白激酶B（AKT）,B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达,并计算Bax/Bcl-2;蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测肾脏组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白的表达并进行半定量分析;酶联免疫法测定血浆中血浆C-反应蛋白（CRP）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6（IL-6）,细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平。结果:与模型组比较,葛根素(100,50 mg·kg-1)治疗组大鼠肾脏指数明显降低（P<0.05,P<0.01）,血清中BUN,SCr,UA含量明显降低（P<0.05,P<0.01）;葛根素各治疗组肾脏组织病理性形态学变化呈不同程度改善,肾小球细胞凋亡状况呈不同程度好转,均以100 mg·kg-1治疗组效果最为显著,葛根素100,50 mg·kg-1治疗组肾小球细胞AI显著降低（P<0.05,P<0.01）,肾脏组织中Bax mRNA表达明显下调且Bcl-2 mRNA表达明显上调（P<0.05,P<0.01）,Bax/Bcl-2明显降低（P<0.01）,且100 mg·kg-1治疗组AKT mRNA表达显著上调（P<0.01）;Caspase-3蛋白表达量明显降低（P<0.05,P<0.01）。葛根素(100,50 mg·kg-1)治疗组大鼠血浆中CRP,TNF-α,IL-6水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）,且100 mg·kg-1治疗组IL-1β,ICAM-1含量水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论:葛根素具有抑制肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡、改善肾功能的作用;其作用机制可能与葛根素能够有效上调AKT基因表达、抑制Caspase-3蛋白表达,下调Bax基因表达、上调Bcl-2基因表达,并降低Bax/Bcl-2,降低炎症因子表达、抑制炎症反应有关。