猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立

被引：15

作者：

张兴娟 ^{[1
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孙元 ^{[1
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刘大飞 ^{[1
]}

仇华吉 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

[2] 扬州大学兽医学院

来源：

中国预防兽医学报 | 2009年 / 31卷 / 11期

关键词：

猪瘟病毒,野毒株,RT-LAMP,鉴别诊断;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.65 [家畜病毒学];

学科分类号：

摘要：

本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果。该方法可检测出不同基因型的CSFV野毒株,其检出极限为2.5TCID50的CSFV,与实时荧光定量RT-PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法的符合率达100%,与引物-探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%。该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法。

引用

页码：864 / 868

页数：5

共 8 条

[1] 环介导等温基因扩增技术及其应用研究进展
常小斌
刘洵
程天印
王小君
陈宇明
[J]. 畜牧兽医科技信息, 2006, (12) : 10 - 12
[2] 环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)在丙型肝炎病毒基因检测中的应用
李启明
马学军
周蕊
彭夫望
高寒春
匡治州
侯云德
[J]. 病毒学报, 2006, (05) : 334 - 338
[3] 我国近期猪瘟分子流行病学动态
孙世琪
靳野
郭慧琛
尚佑军
魏旭文
马军武
韩雪清
邱伯根
梁原祥
刘湘涛
谢庆阁
[J]. 动物医学进展, 2004, (06) : 69 - 71
[4] Simultaneous detection of Classical swine fever virus and North American genotype Porcine reproductive and respiratory syndrome virus using a duplex real-time RT-PCR
Cheng, Dan
Zhao, Jian-Jun
Li, Na
Sun, Yuan
Zhou, Yan-Jun
Zhu, Yan
Tian, Zhi-Jun
Tu, Changchun
Tong, Guang-Zhi
Qiu, Hua-Ji
[J]. JOURNAL OF VIROLOGICAL METHODS, 2008, 151 (02) : 194 - 199
[5] Novel reverse transcription loop-mediated isothermal amplification for rapid detection of foot-and-mouth disease virus
Dukes, J. P.
King, D. P.
Alexandersen, S.
[J]. ARCHIVES OF VIROLOGY, 2006, 151 (06) : 1093 - 1106
[6] Classical swine fever – an update[J] . D.J Paton,I Greiser-Wilke.Research in Veterinary Science . 2003 (3)
[7] Detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by turbidity derived from magnesium pyrophosphate formation
Mori, Y
Nagamine, K
Tomita, N
Notomi, T
[J]. BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 2001, 289 (01) : 150 - 154
[8] Attenuated Lapinized Chinese Strain of Classical Swine Fever Virus: Complete Nucleotide Sequence and Character of 3′-Noncoding Region[J] . H. X. Wu,J. F. Wang,C. Y. Zhang,L. Z. Fu,Z. S. Pan,N. Wang,P. W. Zhang,W. G. Zhao.Virus Genes . 2001 (1)

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