水稻黑条矮缩病毒第七号片段的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

被引:16
作者
钟永旺
周洁
庄斌全
魏春红
李毅
机构
[1] 北京大学生命科学学院
基金
国家高技术研究发展计划(863计划);
关键词
水稻黑条矮缩病毒; 原核表达; RT-PCR; 序列分析;
D O I
10.13343/j.cnki.wsxb.2003.04.007
中图分类号
S435.111 [病害];
学科分类号
摘要
运用RT PCR技术 ,根据玉米粗缩病毒S6的末端序列设计引物 ,从玉米粗缩病感病材料中克隆得到一条 2 2kb长的cDNA片段 ,序列分析表明 ,该片段全长 2 1 93bp ,含两个开放阅读框 ,分别编码 41 0kD和 36 3kD的多肽。序列分析结果表明 ,该cDNA片段及其编码产物与水稻黑条矮缩病毒S7的cDNA序列及编码产物存在最高的相似性 ,推测该cDNA片段为水稻黑条矮缩病毒的S7片段 ,而不是玉米粗缩病毒的S6。分别将该片段的两个阅读框克隆到原核表达载体pET2 1 d及pGEX KG中 ,经IPTG诱导后 ,两种蛋白均得到了高效的表达。表达产物回收后制备并得到了高效价的抗血清。
引用
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