鲍曼不动杆菌外膜蛋白A真核表达载体构建及其诱导Hela细胞不完全自噬

被引：11

作者：

安志远 ^{[1
]}

黄骁舾 ^{[1
]}

丁文一 ^{[2
]}

机构：

[1] 首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心

[2] 中国医学科学院北京协和医院检验科

来源：

免疫学杂志 | 2017年 / 33卷 / 11期

关键词：

鲍曼不动杆菌; 外膜蛋白A; Hela细胞系; 不完全自噬;

D O I：

暂无

中图分类号：

R378 [病原细菌];

学科分类号：

100103 [病原生物学];

摘要：

目的构建鲍曼不动杆菌ATCC19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)的真核表达载体pEGFP-OmpA,研究OmpA对Hela细胞自噬的影响。方法采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌ATCC19606的OmpA基因,将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1,以构建重组质粒pEGFP-OmpA;用脂质体转染法将其转染Hela细胞;流式细胞术、细胞免疫荧光和Western blot检测OmpA表达水平;激光共聚焦显微镜检测OmpA在Hela细胞中的定位;Western blot及透射电子显微镜检测OmpA对Hela细胞自噬的影响。结果经双酶切及测序鉴定表明pEGFP-OmpA质粒构建成功;OmpA可以大量表达于Hela细胞的细胞质和细胞核中;OmpA可导致Hela细胞中自噬相关蛋白LC3BⅡ、p62和Beclin-1表达升高,而且在Hela细胞中发现自噬小体;OmpA会干扰p62降解,引发不完全自噬。结论本研究成功构建pEGFP-OmpA真核表达载体,它可以在Hela细胞中高效表达,并可导致Hela细胞不完全自噬,这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌OmpA引起自噬的机制奠定基础。

引用

页码：996 / 1002

页数：7

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