PCR指纹图技术筛选鼠疫耶尔森菌种特异性探针的研究

目的　利用PCR指纹图技术筛选细菌种特异性探针 ,探索利用PCR指纹图技术实现病原菌通用检测的可能性。方法　以鼠疫耶尔森菌为实验对象 ,利用REP 1和REP 2引物对在非严谨的条件下进行PCR指纹图扩增 ;将所有扩增片段纯化后 ,克隆至pGEM T载体 ,转化大肠杆菌JM10 9;用生物素化的载体引物扩增克隆化片段 ,进行末端标记 ;在硝酸纤维素膜上固定鼠疫杆菌的染色体DNA以及相应对照菌株的染色体DNA ,以末端标记的扩增产物进行杂交 ,通过生物素 链霉亲和素 辣根过氧化物酶系统显色 ,判断扩增片段的特异性。结果　经杂交筛选 ,发现 1个长度约为 90 0bp的扩增具有较好的杂交特异性片段 ,将序列与鼠疫耶尔森菌已完成的基因组序列比较 ,仅发现 4个核苷酸的差异 ;根据这段序列设计的引物对可以特异性地扩增鼠疫耶尔森菌的模板。结论　利用PCR指纹图技术成功筛选到一段鼠疫耶尔森菌的种特异性探针 ,为细菌通用检测技术的研究开辟了新的思路。