右旋糖酐蔗糖酶工程菌株的构建及其培养条件的研究

被引：15

作者：

张洪斌 ^{[1
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朱春宝 ^{[1
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胡又佳 ^{[1
]}

朱宝泉 ^{[1
]}

王雅洁 ^{[2
]}

机构：

[1] 上海医药工业研究院

[2] 合肥工业大学制药工程系

来源：

微生物学报 | 2008年 / 04期

关键词：

右旋糖酐蔗糖酶; 工程菌; 表达; 培养条件;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2008.04.008

中图分类号：

Q93 [微生物学];

学科分类号：

071005 ; 100705 ;

摘要：

【目的】右旋糖酐蔗糖酶是一种以蔗糖为底物,催化转移D-葡萄糖基生成α-葡聚糖或低聚糖的葡萄糖基转移酶。【方法】利用PCR扩增技术,将已获得的右旋糖酐蔗糖酶基因dexYG亚克隆到表达载体PET28a(+)上,转化E.coli BL21(DE3),经过卡那霉素抗性筛选和酶切验证后,得到右旋糖酐蔗糖酶工程菌株BL21(DE3)/pET28-dexYG。【结果】经IPTG诱导该基因在E.coli BL21(DE3)中能有效表达,在诱导过程中菌体生长受到抑制。通过对培养时间、IPTG浓度、培养温度、菌浓(OD600)和pH值等产酶因素的优化考察,得到最佳培养条件为:培养时间5h、IPTG浓度0.5mmol/L、25℃、OD600值1.0和pH6.0。酶活力由最初的5.39U/mL提高到35.62U/mL,其中pH值对产酶活力影响最大,在pH6.0时的最高产酶活力是LB原始pH条件下最高酶活的3.5倍,并且pH值也是导致在诱导后期酶活迅速下降的主要原因之一。【结论】酶的表达和酶活的研究结果表明,构建的工程菌株能够异源高效表达右旋糖酐蔗糖酶,并且表现出较高的酶活力。

引用

页码：492 / 497

页数：6

共 12 条

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