LY294002抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌细胞MGC-803的影响

[目的]探讨磷脂肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002对胃癌细胞MGC-803的PI3K/丝-苏氨酸蛋白激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路活性及细胞株生物学行为的影响。[方法]12.5、25、50μmol/L LY294002作用于胃癌细胞MGC-803(实验组),分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测PI3K/AKT/mTOR通路中关键信号分子PTEN、PI3K、AKT、mTOR、P70S6K、4EBP的m RNA和蛋白的表达情况;同时通过MTT实验、流式细胞术,测定LY294002对胃癌细胞MGC-803的增殖、细胞周期和凋亡的影响。[结果]实验组的PI3K、PTEN、AKT、mTOR、4EBP、P70S6K基因的m RNA相对表达量与对照组(二甲基亚砜)相比,差异有统计学意义(P<0.05),且AKT、mTOR、4EBP、P70S6K的表达量随着LY294002浓度升高而逐渐下降。LY294002对MGC-803细胞AKT、p-mTOR、p-70S6K、p-AKT蛋白的表达有明显抑制作用,且p-mTOR、p-70S6K、p-AKT蛋白的表达随着LY294002浓度升高而逐渐下降。MTT实验结果显示,LY294002对MGC-803细胞的增殖有明显的抑制作用,增殖率随LY294002浓度升高而逐渐降低(F=26.15,P<0.01)。细胞周期实验结果显示,加入LY294002的MGC-803细胞相比于对照组细胞的G0/G1期比例较高(F=358.594,P<0.001)。凋亡实验显示,LY294002组的凋亡率高于对照组且凋亡率随LY294002浓度增加而增加(F=4.929,P<0.05)。[结论]LY294002作用于MGC-803细胞,可使其PI3K/AKT/mTOR信号通路关键信号分子受到不同程度的抑制,AKT、mTOR、4EBP、P70S6K基因的m RNA和磷酸化蛋白的表达量随LY294002浓度升高呈下降趋势,且LY294002可降低细胞增殖率、改变细胞周期比例、提高细胞凋亡率。